豬肺泡巨噬細胞 3D4/21

細胞介紹

母細胞3D4來源于pSV3neo質粒轉染豬原代肺泡巨噬細胞得到的。該克隆通過G418篩選得到。

細胞特性

1） 來源：豬肺

2） 形態：巨噬細胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x10^6 個

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。凍存細胞的復蘇：：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。下面T25瓶為例；

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

細胞凋亡的早期形態學改變是核染色質濃聚、固縮,聚集在核膜周邊，然后是胞漿濃縮、胞膜起泡,繼而細胞核裂解成若干碎片，細胞膜將胞質和染色質斷片包裹，胞漿內形成多個膜結構尚完整的“小泡"及 “凋亡小體" (apoptoticbody)。這不同于細胞壞死的細胞腫脹、胞膜破裂、細胞崩解。

       根據凋亡細胞固有的形態特征，至今為止，已經設計了許多不同的細胞凋亡形態學檢測方法。

流式細胞技術

     流式細胞儀檢測凋亡細胞是通過檢查其光射特征及熒光參數時行的。細胞穿過流式細胞儀的激光束集點時使激光發生散射，分析散射光可以提供細胞大小及結構的信息。散射光包括前向散射光和左向角散射光兩種，前向散射光的強度與細胞大小、體積相產，右向角射光的強度與細胞結構的析射性、顆粒性（granu-larity）有關。

     細胞凋亡過程中出現的形態改變如細胞皺縮、胞膜起泡、核濃縮和碎裂等可以使光散射特性發生改變。早期凋亡細胞主要表現為前向散射光減弱而右向角散射光增強或不變，前者反映了細胞的皺縮，后者反映了細胞的核逐縮及碎裂。晚期凋亡細胞的前向散射光和右向角散射光均減弱。

     由于光散射牧場生并非凋亡細胞的特異性指標，細胞的機械性損傷和細胞壞死也可以使前向散射光減弱。因此，只有將光散射特性的檢測與熒光參數的檢測結合起來才能準確地辨認凋亡細胞。

     細胞凋亡過程中核酸內切酶在DNA分子核小體間的降解，導致小分子DNA漏出，核DNA含量下降，細胞熒光染色后作流式細胞儀分析，可以發現在DNA直方圖上正常二倍體細胞的Go/G1峰前出現一個亞二倍體峰（xub-G1峰，即AP峰--apoptotic peak）,代表凋亡細胞。

    根據此亞二倍體峰可以計算凋亡細胞的百分率。此外，流式細胞術還可以通過測定線粒體膜的電位、溶酶體質子泵的活性及細胞DNA/總蛋白質比例等方法辨認凋亡細胞。

檢測方法：獲取密度1×106細胞/ml左右的細胞懸液，精洗，固定，熒光染料染色，上流式細胞儀分析。

豬肺泡巨噬細胞 3D4/21

小鼠神經干細胞 NE-4C

小鼠胰島β細胞株 Min6

小鼠B細胞淋巴瘤 A20

小鼠肝癌細胞 Hepa1-6

小鼠小膠質細胞 Bv-2

小鼠乳腺癌細胞 4T1

小鼠胚胎瘤細胞 ATDC5

小鼠胰腺癌細胞 PANC02

小鼠膠質瘤細胞 GL261

小鼠肺癌細胞 LLC

小鼠骨肉瘤成骨細胞 K7M2wt

小鼠乳腺癌細胞 EMT6

小鼠海馬神經元細胞 HT22

小鼠小腸內分泌細胞系 STC-1

小鼠乳腺上皮細胞 EpH4-Ev

小鼠肝細胞 AML12

小鼠膀胱癌細胞 MB49

小鼠巨噬細胞 Ana-1

小鼠腎小球系膜細胞 SV40-MES-13

小鼠胚胎肝細胞 BNLCL.2

小鼠肥大細胞瘤細胞 P815

小鼠腎癌細胞 Renca

小鼠腦神經膠質母細胞瘤瘤株 G422

小鼠骨髓瘤細胞 SP2/0

小鼠精原細胞系 GC-1spg

小鼠腎髓質細胞 mIMCD-3

小鼠前列腺癌細胞 RM-1

小鼠宮頸癌細胞 U14

小鼠卵巢癌細胞 ID8

小鼠皮下結締組織細胞 L-WRN

小鼠胰腺腺泡癌細胞 266-6

小鼠骨髓基質細胞　 OP9

小鼠胚胎成骨細胞前體細胞 MC3T3-E1

人子宮頸表皮癌細胞MS751 MS751

小鼠肝癌 H22

小鼠淋巴瘤細胞 EL4

小鼠骨樣細胞 MLO-Y4

小鼠胰島內皮細胞 MS1

豬腎傳代細胞 IBRS-2

恒河猴胚腎細胞 FRHK-4

恒河猴腎細胞 LLC-MK2

昆蟲卵巢細胞 Sf9

科研C6/36白紋伊蚊細胞 C6/36

猴脈絡膜-視網膜內皮細胞 RF/6A

雞肝癌細胞 LMH

倉鼠腎成纖維細胞 BHK-21

非洲綠猴腎細胞 VEROC1008(E6)

豬腎細胞系 PK15

牛腎細胞 MDBK

非洲綠猴腎細胞 VERO

豬睪丸細胞系 ST

貓腎細胞 CRFK

犬腎細胞 MDCK-II

恒河猴腎細胞MA-104 MA-104

絨猴EBV轉化的白細胞 B120-8

豬內皮細胞PED PED

中國倉鼠卵巢細胞 CHO-K1

雞胚胎成纖維細胞 UMNSAH/DF-1

中國倉鼠肺細胞CHL CHL

倉鼠肺細胞 V79

豬肺泡巨噬細胞 3D4/21

中國倉鼠卵巢細胞 CHO

雞淋巴瘤細胞 DT40

猴腎細胞 MARC145

鴨子胚胎成纖維細胞 Duckembryo

中國倉鼠卵巢細胞(懸浮 CHO-S

果蠅胚胎細胞S2 S2

豬腸上皮細胞 IPEC-J2

 豬鼻甲黏膜成纖維細胞 PT-K75

豬肺泡巨噬細胞 3D4/21

 豬腎細胞 PK-15